Полисахарид хлореллы (ПФУ), как природный полисахарид, в последние годы привлек большое внимание ученых благодаря своим преимуществам, заключающимся в низкой токсичности, малом количестве побочных эффектов и широком спектре действия. Его функции по снижению уровня липидов в крови, противоопухолевые, противовоспалительные, против болезни Паркинсона, против старения и т. д. были предварительно подтверждены в экспериментах in vitro и in vivo. Однако до сих пор существует пробел в исследованиях ПФУ как иммуномодулятора человека.

Дендритные клетки (ДК) являются наиболее мощными специализированными антигенпрезентирующими клетками в организме человека. Количество ДК в организме человека чрезвычайно мало, и обычно используется модель индукции, опосредованная цитокинами in vitro, а именно ДК, полученные из мононуклеарных клеток периферической крови человека (moDC). Модель DC, индуцированная in vitro, была впервые описана в 1992 году и представляет собой традиционную систему культивирования DC. Обычно требуется выращивание в течение 6-7 дней. Клетки костного мозга мыши можно культивировать с гранулоцитарно-макрофагальным колониестимулирующим фактором (GM-CSF) и интерлейкином (IL)-4 для получения незрелых DC (группа PBS). Цитокины добавляют в качестве зрелых стимулов и культивируют в течение 1-2 дней для получения зрелых ДК. В другом исследовании сообщалось, что очищенные CD14+ клетки человека культивировали с интерфероном-β (IFN-β) или IL-4 в течение 5 дней, а затем культивировали с фактором некроза опухоли-а (TNF-a) в течение 2 дней для получения ДК с высоким содержанием экспрессия CD11c и CD83, которые обладают более сильной способностью стимулировать пролиферацию аллогенных CD4+T-клеток и CD8+T-клеток. Многочисленные полисахариды природного происхождения обладают превосходной иммуномодулирующей активностью, например, полисахариды из грибов шиитаке, грибов с разделенными жабрами, грибов Юнчжи и кокосовых орехов пория, которые нашли применение в клинической практике. Они могут эффективно улучшить иммунную функцию организма, повысить иммунитет и служить вспомогательной терапией для противоопухолевого лечения. Однако имеется мало исследовательских отчетов о ПФУ как иммуномодуляторе человека. Таким образом, в этой статье проводятся предварительные исследования роли и связанных с ней механизмов ПФК в содействии созреванию moDC, чтобы оценить потенциал ПФК как естественного иммуномодулятора.

Из-за чрезвычайно низкой доли ДК в тканях человека и высокой межвидовой консервативности между ДК мыши и ДК человека, чтобы решить исследовательские трудности, вызванные низким производством ДК, in vitro модели индукции ДК, полученные из мононуклеарных клеток периферической крови человека были изучены, с помощью которых можно получить ДК с хорошей иммуногенностью за короткий период времени. Поэтому в данном исследовании использовался традиционный метод индуцирования ДК человека in vitro: совместное культивирование rhGM CSF и rhIL-4 in vitro, смена среды через день и получение незрелых ДК на 5-е сутки; На 6-й день добавляли равные объемы PBS, PFC и LPS в соответствии с группировкой и культивировали в течение 24 часов в соответствии с протоколом культивирования для индукции DC, полученных из мононуклеарных клеток периферической крови человека.

Полисахариды, полученные из натуральных продуктов, обладают преимуществами низкой токсичности и низкой стоимости в качестве иммуностимуляторов. После предварительных экспериментов наша исследовательская группа обнаружила, что PFC значительно усиливает зрелый маркер CD83 на поверхности DC-клеток, полученных из мононуклеарных клеток периферической крови человека, индуцированных in vitro. Результаты проточной цитометрии показали, что вмешательство PFC в концентрации 10 мкг/мл в течение 24 часов приводило к пиковой экспрессии зрелого маркера CD83 на поверхности ДК, что указывает на то, что ДК перешли в зрелое состояние. Таким образом, наша исследовательская группа определила план индукции и вмешательства in vitro. CD83 является важным зрелым биомаркером на поверхности ДК, тогда как CD86 служит важной костимулирующей молекулой на поверхности ДК, действуя как второй сигнал для активации Т-клеток. Повышенная экспрессия двух биомаркеров CD83 и CD86 указывает на то, что ПФК способствует созреванию ДК, происходящих из мононуклеарных клеток периферической крови человека, что позволяет предположить, что ПФК может одновременно увеличивать уровень секреции цитокинов на поверхности ДК. Таким образом, в этом исследовании оценивались уровни цитокинов IL-6, TNF-a и IL-10, секретируемых ДК, с помощью ELISA. IL-10 тесно связан с иммунной толерантностью ДК, а ДК с иммунной толерантностью обычно используются при лечении опухолей, что дает потенциальные терапевтические идеи для иммунной толерантности при трансплантации органов; Семейство 1L-6 играет важную роль во врожденном и адаптивном иммунитете, кроветворении и противовоспалительном действии; Есть исследования, показывающие, что IL-6 и TGF β совместно участвуют в дифференцировке клеток Th17; Когда в организм проникает вирус, TNF-a, продуцируемый ДК в ответ на активацию вируса, действует как аутокринный фактор созревания, способствующий созреванию ДК. Блокирование TNF-a переводит DC в незрелую стадию, не позволяя им полностью реализовать свою функцию презентации антигена. Данные ELISA в этом исследовании показали, что уровень секреции IL-10 в группе PFC был значительно повышен по сравнению с двумя другими группами, что указывает на то, что PFC повышает иммунную толерантность DC; Увеличение уровней секреции IL-6 и TNF-a позволяет предположить, что PFC может усиливать DC, способствуя дифференцировке Т-клеток.