O polissacarídeo da Chlorella (PFC), um polissacarídeo natural, tem atraído muita atenção de pesquisadores nos últimos anos devido às suas vantagens, como baixa toxicidade, poucos efeitos colaterais e amplo espectro de ação. Suas funções na redução dos níveis de lipídios no sangue, ação antitumoral, anti-inflamatória, antiparkinsoniana, antienvelhecimento, entre outras, foram preliminarmente validadas em experimentos in vitro e in vivo. No entanto, ainda há lacunas na pesquisa sobre o PFC como imunomodulador humano.

As células dendríticas (DCs) são as células apresentadoras de antígenos especializadas mais potentes do corpo humano. O número de DCs no corpo humano é extremamente pequeno, e um modelo de indução in vitro mediado por citocinas, especificamente DCs derivadas de células mononucleares do sangue periférico humano (moDCs), é comumente utilizado. O modelo de DCs induzidas in vitro foi descrito pela primeira vez em 1992, sendo este o sistema de cultura tradicional para DCs. Geralmente, requer cultivo por 6 a 7 dias. Células da medula óssea de camundongos podem ser cultivadas com fator estimulador de colônias de granulócitos e macrófagos (GM-CSF) e interleucina (IL)-4 para obtenção de DCs imaturas (grupo PBS). Citocinas são adicionadas como estímulos para a maturação e cultivadas por 1 a 2 dias para obtenção de DCs maduras. Outro estudo relatou que células CD14+ humanas purificadas foram cultivadas com interferon-β (IFN-β) ou IL-4 por 5 dias e, em seguida, cultivadas com fator de necrose tumoral-α (TNF-α) por 2 dias para obter células dendríticas (DCs) com alta expressão de CD11c e CD83, as quais possuem maior capacidade de promover a proliferação de células T CD4+ e CD8+ alogênicas. Numerosos polissacarídeos de fontes naturais apresentam excelente atividade imunomoduladora, como os polissacarídeos de cogumelos shiitake, cogumelos de guelra dividida, cogumelos Yunzhi e Poria cocos, que já são utilizados na prática clínica. Eles podem melhorar efetivamente a função imunológica do organismo, fortalecer a imunidade e servir como terapias adjuvantes para o tratamento antitumoral. No entanto, existem poucos relatos de pesquisa sobre o PFC como imunomodulador humano. Portanto, este artigo realiza uma pesquisa preliminar sobre o papel e os mecanismos relacionados do PFC na promoção da maturação de moDCs, a fim de avaliar o potencial do PFC como um modulador imunológico natural.

Devido à proporção extremamente baixa de células dendríticas (DCs) em tecidos humanos e à alta conservação interespecífica entre DCs de camundongos e DCs humanas, a fim de solucionar as dificuldades de pesquisa causadas pela baixa produção de DCs, modelos de indução in vitro de DCs derivadas de células mononucleares do sangue periférico humano têm sido estudados, permitindo a obtenção de DCs com boa imunogenicidade em um curto período de tempo. Portanto, este estudo utilizou o método tradicional de indução de DCs humanas in vitro: co-cultura de rhGM CSF e rhIL-4 in vitro, com troca de meio a cada dois dias, obtendo-se DCs imaturas no 5º dia; no 6º dia, volumes iguais de PBS, PFC e LPS foram adicionados de acordo com os grupos e cultivados por 24 horas, conforme o protocolo de cultura para indução de DCs derivadas de células mononucleares do sangue periférico humano.

Polissacarídeos derivados de produtos naturais apresentam as vantagens de baixa toxicidade e baixo custo como imunoestimulantes. Após experimentos preliminares, nosso grupo de pesquisa descobriu que o PFC aumenta significativamente a expressão do marcador de maturação CD83 na superfície de células dendríticas (DCs) derivadas de células mononucleares do sangue periférico humano induzidas in vitro. Os resultados da citometria de fluxo mostraram que a intervenção com PFC na concentração de 10 μg/mL por 24 horas resultou em um pico de expressão do marcador de maturação CD83 na superfície das DCs, indicando que as DCs atingiram um estado de maturação. Portanto, nosso grupo de pesquisa determinou o plano de indução e intervenção in vitro. O CD83 é um importante biomarcador de maturação na superfície das DCs, enquanto o CD86 atua como uma importante molécula coestimuladora na superfície das DCs, funcionando como um segundo sinal para a ativação de células T. O aumento da expressão dos dois biomarcadores, CD83 e CD86, indica que o PFC promove a maturação de DCs derivadas de células mononucleares do sangue periférico humano, sugerindo que o PFC pode aumentar simultaneamente o nível de secreção de citocinas na superfície das DCs. Portanto, este estudo avaliou os níveis das citocinas IL-6, TNF-α e IL-10 secretadas por células dendríticas (DCs) utilizando ELISA. A IL-10 está intimamente relacionada à tolerância imunológica das DCs, e DCs com tolerância imunológica são comumente utilizadas no tratamento de tumores, fornecendo ideias terapêuticas potenciais para a tolerância imunológica em transplantes de órgãos. A família IL-6 desempenha um papel importante na imunidade inata e adaptativa, na hematopoiese e em efeitos anti-inflamatórios. Existem estudos que indicam que a IL-6 e o ​​TGF-β participam conjuntamente da diferenciação de células Th17. Quando o organismo é invadido por um vírus, o TNF-α produzido pelas DCs em resposta à ativação viral atua como um fator de maturação autócrina para promover a maturação das DCs. O bloqueio do TNF-α coloca as DCs em um estágio imaturo, impedindo-as de exercer plenamente sua função de apresentação de antígenos. Os dados do ELISA neste estudo mostraram que o nível de secreção de IL-10 no grupo PFC aumentou significativamente em comparação com os outros dois grupos, indicando que o PFC melhora a tolerância imunológica das DCs; o aumento nos níveis de secreção de IL-6 e TNF-α sugere que o PFC pode ter o efeito de estimular as DCs a promover a diferenciação de células T.