O polissacarídeo da Chlorella (PFC), como polissacarídeo natural, tem atraído muita atenção dos estudiosos nos últimos anos devido às suas vantagens de baixa toxicidade, baixos efeitos colaterais e efeitos de amplo espectro. Suas funções na redução de lipídios no sangue, antitumor, antiinflamatório, anti Parkinson, antienvelhecimento, etc. foram preliminarmente validadas em experimentos in vitro e in vivo. No entanto, ainda existe uma lacuna na investigação do PFC como modulador imunitário humano.

As células dendríticas (DCs) são as células apresentadoras de antígenos especializadas mais poderosas do corpo humano. O número de DCs no corpo humano é extremamente pequeno, e um modelo de indução in vitro mediado por citocinas, nomeadamente DCs derivadas de células mononucleares de sangue periférico humano (moDCs), é comumente usado. O modelo de DC induzido in vitro foi relatado pela primeira vez em 1992, que é o sistema de cultura tradicional para DCs. Geralmente, requer cultivo por 6 a 7 dias. Células de medula óssea de camundongo podem ser cultivadas com fator estimulador de colônias de macrófagos granulócitos (GM-CSF) e interleucina (IL) -4 para obter DCs imaturas (grupo PBS). As citocinas são adicionadas como estímulos maduros e cultivadas durante 1-2 dias para obter DCs maduras. Outro estudo relatou que células CD14+ humanas purificadas foram cultivadas com interferon – β (IFN – β) ou IL-4 por 5 dias e depois cultivadas com fator de necrose tumoral-a (TNF-a) por 2 dias para obter DCs com alta expressão de CD11c e CD83, que têm maior capacidade de promover a proliferação de células T CD4+ alogênicas e células T CD8+. Numerosos polissacarídeos de fontes naturais têm excelente atividade imunomoduladora, como polissacarídeos de cogumelos shiitake, cogumelos de guelras divididas, cogumelos Yunzhi e Poria cocos, que têm sido aplicados na prática clínica. Eles podem efetivamente melhorar a função imunológica do corpo, aumentar a imunidade e servir como terapias adjuvantes para o tratamento antitumoral. No entanto, existem poucos relatórios de pesquisa sobre o PFC como modulador imunológico humano. Portanto, este artigo conduz pesquisas preliminares sobre o papel e os mecanismos relacionados do PFC na promoção da maturação de moDCs, a fim de avaliar o potencial do PFC como um modulador imunológico natural.

Devido à proporção extremamente baixa de DCs em tecidos humanos e à alta conservação interespécies entre DCs de camundongo e DCs humanas, a fim de resolver as dificuldades de pesquisa causadas pela baixa produção de DC, modelos de indução in vitro de DCs derivadas de células mononucleares do sangue periférico humano foram estudados, que podem obter DCs com boa imunogenicidade em um curto período de tempo. Portanto, este estudo utilizou o método tradicional de indução de DCs humanas in vitro: cocultura de rhGM CSF e rhIL-4 in vitro, trocando o meio em dias alternados e obtenção de DCs imaturas no 5º dia; No 6º dia, volumes iguais de PBS, PFC e LPS foram adicionados de acordo com o agrupamento e cultivados por 24 horas como protocolo de cultura para indução de DCs derivadas de células mononucleares do sangue periférico humano.

Os polissacarídeos derivados de produtos naturais apresentam as vantagens de baixa toxicidade e baixo custo como imunoestimulantes. Após experimentos preliminares, nosso grupo de pesquisa descobriu que o PFC aumenta significativamente o marcador maduro CD83 na superfície de células DC derivadas de células mononucleares do sangue periférico humano induzidas in vitro. Os resultados da citometria de fluxo mostraram que a intervenção do PFC a uma concentração de 10 μg/mL durante 24 horas resultou num pico de expressão do marcador maduro CD83 na superfície das DCs, indicando que as DCs entraram num estado maduro. Portanto, nosso grupo de pesquisa determinou o plano de indução e intervenção in vitro. O CD83 é um importante biomarcador maduro na superfície das DCs, enquanto o CD86 serve como uma importante molécula coestimuladora na superfície das DCs, atuando como o segundo sinal para a ativação das células T. A expressão aumentada de dois biomarcadores CD83 e CD86 indica que o PFC promove a maturação de DCs derivadas de células mononucleares do sangue periférico humano, sugerindo que o PFC pode aumentar simultaneamente o nível de secreção de citocinas na superfície das DCs. Portanto, este estudo avaliou os níveis das citocinas IL-6, TNF-a e IL-10 secretadas pelas DCs por meio de ELISA. A IL-10 está intimamente relacionada à tolerância imunológica das DCs, e as DCs com tolerância imunológica são comumente usadas no tratamento de tumores, fornecendo ideias terapêuticas potenciais para tolerância imunológica em transplantes de órgãos; A família 1L-6 desempenha um papel importante na imunidade inata e adaptativa, na hematopoiese e nos efeitos antiinflamatórios; Existem estudos indicando que IL-6 e TGF β participam conjuntamente na diferenciação de células Th17; Quando o corpo é invadido por um vírus, o TNF-a produzido pelas DCs em resposta à ativação do vírus atua como um fator de maturação autócrina para promover a maturação das DC. O bloqueio do TNF-a colocará as DCs em um estágio imaturo, impedindo-as de exercer plenamente sua função de apresentação de antígeno. Os dados de ELISA neste estudo mostraram que o nível de secreção de IL-10 no grupo PFC foi significativamente aumentado em comparação com os outros dois grupos, indicando que o PFC aumenta a tolerância imunológica das DCs; Os níveis crescentes de secreção de IL-6 e TNF-a sugerem que o PFC pode ter o efeito de aumentar as DC para promover a diferenciação de células T.