Hlorellas polisaharīds (PFC) kā dabisks polisaharīds pēdējos gados ir piesaistījis lielu zinātnieku uzmanību, jo tam piemīt zemas toksicitātes, zemas blakusparādības un plaša spektra iedarbība. Tās funkcijas asins lipīdu līmeņa pazemināšanā, pretaudzēju, pretiekaisuma, Parkinsona slimības, pretnovecošanās utt. ir provizoriski apstiprinātas eksperimentos in vitro un in vivo. Tomēr joprojām pastāv nepilnības pētījumos par PFC kā cilvēka imūnmodulatoru.

Dendrītiskās šūnas (DC) ir visspēcīgākās specializētās antigēnu prezentējošās šūnas cilvēka ķermenī. DC skaits cilvēka ķermenī ir ārkārtīgi mazs, un parasti tiek izmantots citokīnu mediēts in vitro indukcijas modelis, proti, cilvēka perifēro asiņu mononukleāro šūnu DC (moDC). Par in vitro inducēto līdzstrāvas modeli pirmo reizi tika ziņots 1992. gadā, kas ir tradicionālā DC kultūras sistēma. Parasti tas ir jāaudzē 6-7 dienas. Peļu kaulu smadzeņu šūnas var kultivēt ar granulocītu makrofāgu koloniju stimulējošu faktoru (GM-CSF) un interleikīnu (IL) -4, lai iegūtu nenobriedušus DC (PBS grupa). Citokīnus pievieno kā nobriedušu stimulu un kultivē 1–2 dienas, lai iegūtu nobriedušus DC. Citā pētījumā ziņots, ka attīrītas cilvēka CD14+ šūnas tika kultivētas ar interferonu-β (IFN-β) vai IL-4 5 dienas un pēc tam kultivētas ar audzēja nekrozes faktoru-a (TNF-a) 2 dienas, lai iegūtu DC ar augstu. CD11c un CD83 ekspresija, kam ir spēcīgāka spēja veicināt alogēnu CD4+T šūnu un CD8+T šūnu proliferāciju. Daudziem polisaharīdiem no dabīgiem avotiem ir lieliska imūnmodulējoša iedarbība, piemēram, polisaharīdiem no šitaki sēnēm, šķelto žaunu sēnēm, Yunzhi sēnēm un Poria kokosiem, kas ir izmantoti klīniskajā praksē. Tie var efektīvi uzlabot organisma imūno funkciju, uzlabot imunitāti un kalpot kā palīgterapija pretvēža ārstēšanā. Tomēr ir maz pētījumu ziņojumu par PFC kā cilvēka imūnmodulatoru. Tāpēc šajā rakstā tiek veikts sākotnējais pētījums par PFC lomu un saistītajiem mehānismiem, veicinot moDC nobriešanu, lai novērtētu PFC kā dabiska imūnmodulatora potenciālu.

Sakarā ar ārkārtīgi zemo DC īpatsvaru cilvēka audos un augsto sugu saglabāšanos starp peles DC un cilvēka DC, lai atrisinātu pētniecības grūtības, ko rada zema līdzstrāvas ražošana, in vitro indukcijas modeļi DC, kas iegūti no cilvēka perifēro asiņu mononukleārajām šūnām. ir pētīti, kas īsā laika periodā var iegūt DC ar labu imunogenitāti. Tāpēc šajā pētījumā tika izmantota tradicionālā cilvēka DC inducēšanas metode in vitro: rhGM CSF un rhIL-4 kopkultūra in vitro, barotnes maiņa katru otro dienu un nenobriedušu DC iegūšana 5. dienā; 6. dienā tika pievienoti vienādi PBS, PFC un LPS tilpumi atbilstoši grupēšanai un kultivēti 24 stundas kā kultivēšanas protokols DC inducēšanai, kas iegūti no cilvēka perifēro asiņu mononukleārajām šūnām.

Polisaharīdiem, kas iegūti no dabīgiem produktiem, ir zemas toksicitātes priekšrocības un zemas izmaksas kā imūnstimulējoši līdzekļi. Pēc provizoriskiem eksperimentiem mūsu pētniecības grupa atklāja, ka PFC ievērojami uzlabo nobriedušu marķieri CD83 uz cilvēka perifēro asiņu mononukleāro šūnu DC šūnu virsmas, kas inducētas in vitro. Plūsmas citometrijas rezultāti parādīja, ka PFC iejaukšanās koncentrācijā 10 μg / ml 24 stundas izraisīja nobriedušā marķiera CD83 maksimālo ekspresiju uz DC virsmas, norādot, ka DC nonāca nobriedušā stāvoklī. Tāpēc mūsu pētnieku grupa noteica in vitro indukcijas un iejaukšanās plānu. CD83 ir svarīgs nobriedis biomarķieris uz DC virsmas, savukārt CD86 kalpo kā svarīga stimulējoša molekula uz DC virsmas, kas darbojas kā otrais signāls T šūnu aktivizēšanai. Divu biomarķieru CD83 un CD86 pastiprinātā ekspresija norāda, ka PFC veicina cilvēka perifēro asiņu mononukleāro šūnu DC nobriešanu, kas liecina, ka PFC vienlaikus var palielināt citokīnu sekrēcijas līmeni uz DC virsmas. Tāpēc šajā pētījumā tika novērtēts citokīnu IL-6, TNF-a un IL-10 līmenis, ko izdala DC, izmantojot ELISA. IL-10 ir cieši saistīts ar DC imūno toleranci, un DC ar imūno toleranci parasti izmanto audzēju ārstēšanā, nodrošinot potenciālas terapeitiskas idejas imūno tolerancei orgānu transplantācijā; 1L-6 saimei ir svarīga loma iedzimtajā un adaptīvajā imunitātē, hematopoēzē un pretiekaisuma iedarbībā; Ir pētījumi, kas liecina, ka IL-6 un TGF β kopīgi piedalās Th17 šūnu diferenciācijā; Kad organismā iekļūst vīruss, TNF-a, ko ražo DC, reaģējot uz vīrusa aktivāciju, darbojas kā autokrīna nobriešanas faktors, lai veicinātu DC nobriešanu. Bloķējot TNF-a, DC nonāks nenobriedušā stadijā, neļaujot tiem pilnībā īstenot savu antigēna prezentācijas funkciju. ELISA dati šajā pētījumā parādīja, ka IL-10 sekrēcijas līmenis PFC grupā bija ievērojami paaugstināts, salīdzinot ar pārējām divām grupām, norādot, ka PFC uzlabo DC imūno toleranci; Pieaugošais IL-6 un TNF-a sekrēcijas līmenis liecina, ka PFC var uzlabot DC, lai veicinātu T šūnu diferenciāciju.