Klorella polüsahhariid (PFC) on looduslik polüsahhariid, mis on viimastel aastatel pälvinud teadlaste suurt tähelepanu, kuna sellel on madal toksilisus, vähesed kõrvalmõjud ja laia toimespektriga toime. Selle funktsioonid vere lipiidide sisalduse vähendamisel, kasvajavastased, põletikuvastased, Parkinsoni tõvevastased, vananemisvastased jne funktsioonid on eelnevalt valideeritud in vitro ja in vivo katsetes. Siiski on PFC kui inimese immuunmodulaatori uuringutes endiselt lünk.

Dendriitrakud (DC-d) on inimkeha võimsaimad spetsiaalsed antigeeni esitlevad rakud. DC-de arv inimkehas on äärmiselt väike ja tavaliselt kasutatakse tsütokiinide vahendatud in vitro induktsioonimudelit, nimelt inimese perifeerse vere mononukleaarsetest rakkudest pärinevaid DC-sid (moDC-sid). In vitro indutseeritud alalisvoolu mudelist teatati esmakordselt 1992. aastal, mis on DC-de traditsiooniline kultuurisüsteem. Tavaliselt vajab see kasvatamist 6-7 päeva. Hiire luuüdi rakke saab kultiveerida granulotsüütide makrofaagide kolooniaid stimuleeriva faktoriga (GM-CSF) ja interleukiiniga (IL) -4, et saada ebaküpsed DC-d (PBS-rühm). Tsütokiinid lisatakse küpsete stiimulitena ja kultiveeritakse küpsete DC-de saamiseks 1–2 päeva. Teises uuringus teatati, et puhastatud inimese CD14+ rakke kultiveeriti 5 päeva interferoon-β (IFN-β) või IL-4-ga ja seejärel 2 päeva jooksul tuumori nekroosifaktor-a (TNF-a), et saada kõrge kontsentratsiooniga DC-d. CD11c ja CD83 ekspressioon, millel on tugevam võime soodustada allogeensete CD4+T-rakkude ja CD8+T-rakkude proliferatsiooni. Paljudel looduslikest allikatest pärit polüsahhariididel on suurepärane immunomoduleeriv toime, näiteks shiitake seente polüsahhariidid, lõhestatud nakkeseened, Yunzhi seened ja Poria cocos, mida on kasutatud kliinilises praktikas. Need võivad tõhusalt parandada organismi immuunfunktsiooni, tugevdada immuunsust ja olla abistava ravina kasvajavastases ravis. Siiski on vähe uurimisaruandeid PFC kui inimese immuunmodulaatori kohta. Seetõttu tehakse selles artiklis eeluuringud PFC rolli ja sellega seotud mehhanismide kohta moDC-de küpsemise soodustamisel, et hinnata PFC potentsiaali loodusliku immuunmodulaatorina.

Kuna DC-de osakaal inimese kudedes on äärmiselt väike ning hiire DC-de ja inimese DC-de vahel on suur liikidevaheline säilivus, on madala alalisvoolu tootmisega seotud uurimisraskuste lahendamiseks võimalik kasutada inimese perifeerse vere mononukleaarsetest rakkudest tuletatud DC-de in vitro induktsioonimudeleid. on uuritud, mis võivad lühikese aja jooksul saada hea immunogeensusega DC-sid. Seetõttu kasutati selles uuringus inimese DC-de indutseerimiseks in vitro traditsioonilist meetodit: rhGM CSF ja rhIL-4 kokultiveerimine in vitro, söötme vahetamine ülepäeviti ja ebaküpsete DCde saamine 5. päeval; 6. päeval lisati vastavalt rühmitamisele võrdsed kogused PBS-i, PFC-d ja LPS-i ning kultiveeriti 24 tundi kultuuriprotokollina inimese perifeerse vere mononukleaarsetest rakkudest pärinevate DC-de indutseerimiseks.

Looduslikest saadustest saadud polüsahhariidide eeliseks on madal toksilisus ja madal hind immunostimulantidena. Pärast esialgseid katseid leidis meie uurimisrühm, et PFC suurendab oluliselt küpset markerit CD83 inimese perifeerse vere mononukleaarsetest rakkudest pärinevate in vitro indutseeritud DC-rakkude pinnal. Voolutsütomeetria tulemused näitasid, et PFC sekkumine kontsentratsioonil 10 μg / ml 24 tunni jooksul põhjustas küpse markeri CD83 maksimaalse ekspressiooni DC-de pinnal, mis näitab, et DC-d sisenesid küpsesse olekusse. Seetõttu määras meie uurimisrühm kindlaks in vitro induktsiooni- ja sekkumisplaani. CD83 on oluline küps biomarker DC-de pinnal, samas kui CD86 toimib olulise kaas-stimuleeriva molekulina DC-de pinnal, toimides teise signaalina T-rakkude aktiveerimiseks. Kahe biomarkeri CD83 ja CD86 suurenenud ekspressioon näitab, et PFC soodustab inimese perifeerse vere mononukleaarsetest rakkudest pärinevate DC-de küpsemist, mis viitab sellele, et PFC võib samaaegselt suurendada tsütokiinide sekretsiooni taset DC-de pinnal. Seetõttu hinnati selles uuringus ELISA abil DC-de poolt sekreteeritud tsütokiinide IL-6, TNF-a ja IL-10 taset. IL-10 on tihedalt seotud DC-de immuuntaluvusega ja immuuntaluvusega DC-sid kasutatakse tavaliselt kasvajaravis, pakkudes potentsiaalseid terapeutilisi ideid immuuntolerantsuseks elundisiirdamisel; 1L-6 perekond mängib olulist rolli kaasasündinud ja adaptiivse immuunsuse, vereloome ja põletikuvastase toime tagamisel; On uuringuid, mis näitavad, et IL-6 ja TGF β osalevad ühiselt Th17 rakkude diferentseerumises; Kui kehasse tungib viirus, toimib DC-de poolt vastusena viiruse aktiveerimisele toodetud TNF-a autokriinse küpsemisfaktorina, mis soodustab alalisvoolu küpsemist. TNF-a blokeerimine viib DC-d ebaküpsesse staadiumisse, takistades neil täielikult oma antigeeni esitlemisfunktsiooni rakendada. Selle uuringu ELISA andmed näitasid, et IL-10 sekretsiooni tase PFC rühmas oli märkimisväärselt suurenenud võrreldes kahe teise rühmaga, mis näitab, et PFC suurendab DC-de immuuntolerantsust; IL-6 ja TNF-a suurenevad sekretsioonitasemed viitavad sellele, et PFC võib suurendada DC-d, et soodustada T-rakkude diferentseerumist.