Полизахаридът от Chlorella (PFC), като естествен полизахарид, привлече много внимание от страна на учените през последните години поради своите предимства на ниска токсичност, ниски странични ефекти и широкоспектърни ефекти. Неговите функции за понижаване на липидите в кръвта, противотуморни, противовъзпалителни, против Паркинсон, против стареене и т.н. са предварително валидирани in vitro и in vivo експерименти. Въпреки това, все още има празнота в изследванията на PFC като човешки имунен модулатор.

Дендритните клетки (DC) са най-мощните специализирани антиген-представящи клетки в човешкото тяло. Броят на DCs в човешкото тяло е изключително малък и често се използва цитокин медииран in vitro индукционен модел, а именно DCs, получени от човешки периферни кръвни мононуклеарни клетки (moDCs). In vitro индуцираният DC модел е докладван за първи път през 1992 г., което е традиционната система за култура за DC. Обикновено изисква отглеждане за 6-7 дни. Клетки от костен мозък на мишка могат да бъдат култивирани с фактор, стимулиращ колония на гранулоцитни макрофаги (GM-CSF) и интерлевкин (IL) -4, за да се получат незрели DCs (PBS група). Цитокините се добавят като зрели стимули и се култивират за 1-2 дни, за да се получат зрели DC. Друго проучване съобщава, че пречистени човешки CD14+ клетки са култивирани с интерферон – β (IFN – β) или IL-4 в продължение на 5 дни и след това култивирани с тумор некрозисфактор-a (TNF-a) в продължение на 2 дни, за да се получат DCs с висока експресия на CD11c и CD83, които имат по-силна способност да стимулират пролиферацията на алогенни CD4+T клетки и CD8+T клетки. Множество полизахариди от естествени източници имат отлична имуномодулираща активност, като полизахаридите от гъбите шийтаке, хрилните гъби, гъбите Yunzhi и Poria cocos, които се прилагат в клиничната практика. Те могат ефективно да подобрят имунната функция на организма, да повишат имунитета и да служат като адювантни терапии за противотуморно лечение. Въпреки това, има малко доклади от изследвания за PFC като човешки имунен модулатор. Следователно тази статия провежда предварително изследване на ролята и свързаните с нея механизми на PFC за насърчаване на съзряването на moDCs, за да се оцени потенциалът на PFC като естествен имунен модулатор.

Поради изключително ниския дял на DCs в човешките тъкани и високата междувидова консервация между миши DCs и човешки DCs, за да се решат изследователските трудности, причинени от ниското производство на DCs, in vitro модели на индукция на DCs, получени от човешки мононуклеарни клетки от периферна кръв са изследвани, които могат да получат DC с добра имуногенност за кратък период от време. Следователно, това проучване използва традиционния метод за индуциране на човешки DCs in vitro: съвместно култивиране на rhGM CSF и rhIL-4 in vitro, смяна на средата през ден и получаване на незрели DCs на 5-ия ден; На 6-ия ден бяха добавени равни обеми PBS, PFC и LPS според групирането и култивирани в продължение на 24 часа като протокол за култура за индуциране на DCs, получени от мононуклеарни клетки на човешка периферна кръв.

Полизахаридите, получени от природни продукти, имат предимствата на ниска токсичност и ниска цена като имуностимуланти. След предварителни експерименти, нашата изследователска група установи, че PFC значително подобрява зрелия маркер CD83 на повърхността на DC клетки, получени от човешки периферни кръвни мононуклеарни клетки, индуцирани in vitro. Резултатите от поточната цитометрия показват, че интервенцията на PFC при концентрация от 10 μg/mL за 24 часа води до пикова експресия на зрелия маркер CD83 на повърхността на DCs, което показва, че DCs са навлезли в зряло състояние. Затова нашата изследователска група определи плана за ин витро индукция и интервенция. CD83 е важен зрял биомаркер на повърхността на DC, докато CD86 служи като важна костимулираща молекула на повърхността на DC, действайки като втори сигнал за активиране на Т клетки. Повишената експресия на два биомаркера CD83 и CD86 показва, че PFC насърчава узряването на DCs, получени от човешки периферни кръвни мононуклеарни клетки, което предполага, че PFC може едновременно да повиши нивото на секреция на цитокини на повърхността на DCs. Следователно, това проучване оценява нивата на цитокини IL-6, TNF-a и IL-10, секретирани от DCs, използвайки ELISA. IL-10 е тясно свързан с имунната толерантност на DCs и DCs с имунна толерантност обикновено се използват при лечение на тумори, предоставяйки потенциални терапевтични идеи за имунна толерантност при трансплантация на органи; Семейството 1L-6 играе важна роля във вродения и адаптивен имунитет, хемопоезата и противовъзпалителните ефекти; Има проучвания, които показват, че IL-6 и TGF β съвместно участват в диференциацията на Th17 клетки; Когато тялото е нападнато от вирус, TNF-a, произведен от DCs в отговор на активирането на вируса, действа като автокринен фактор за съзряване, за да насърчи съзряването на DC. Блокирането на TNF-a ще постави DC в незрял стадий, като им попречи да упражняват напълно своята функция за представяне на антиген. Данните от ELISA в това проучване показват, че нивото на секреция на IL-10 в PFC групата е значително повишено в сравнение с другите две групи, което показва, че PFC повишава имунната толерантност към DCs; Увеличаващите се нива на секреция на IL-6 и TNF-a предполагат, че PFC може да има ефект на усилване на DC за насърчаване на диференциацията на Т клетките.